為什么要驗證HCP抗體覆蓋率？

在對工藝中HCP（宿主細胞蛋白）的監控和產(chǎn)品放行中，ELISA一直被用作HCP檢測的金標準。這主要是因為ELISA可以在mg/ml級別的產(chǎn)品蛋白中有效地檢測ng/ml級別的HCP殘留。并且ELISA的操作簡(jiǎn)便，是經(jīng)典的免疫學(xué)檢測方法。但ELISA檢測HCP也有方法的局限性，比如不能從ELISA的結果中知道樣品中有哪些HCP，或者用于ELISA檢測的抗體與哪些HCP發(fā)生了免疫反應。因此，監管部門(mén)要求在使用ELISA檢測過(guò)程中HCP殘留含量時(shí)，不僅要通過(guò)方法學(xué)驗證證明試劑盒的準確度，精密度，靈敏度等，而且還需要證明使用的HCP抗體有廣泛的反應性，即HCP抗體覆蓋率。

AAE是檢測HCP抗體覆蓋率的更有效方法

2014年，作為過(guò)程污染物殘留檢測產(chǎn)品領(lǐng)先開(kāi)發(fā)商，Cygnus結合多年HCP抗體及試劑盒開(kāi)發(fā)經(jīng)驗，推出了Affinity Antibody Extraction（AAE）方法驗證覆蓋率，突破了傳統2DWB方法驗證覆蓋率的局限性，更真實(shí)準確反應HCP抗體覆蓋率。AAE提取富集的樣品和未經(jīng)AAE提取的樣品分別經(jīng)過(guò)2D PAGE分離后使用銀染的方法對得到的點(diǎn)進(jìn)行匹配、計數、計算覆蓋率。這種方法一經(jīng)上市后，廣泛得到生物制藥企業(yè)和監控部門(mén)的認可。

AAE+MS更清晰地展示了工藝中HCP殘留情況，進(jìn)一步對產(chǎn)品質(zhì)量安全做風(fēng)險評估

現階段，常用的HCP抗體覆蓋率驗證的方法都存在其自身的局限性。AAE方法解決了傳統2DWB中的低靈敏度和低特異性的問(wèn)題。而且，由于A(yíng)AE可以在富集本身含量較低的HCP的同時(shí)，還可以大幅降低中間品和終產(chǎn)品中的藥物蛋白。這使對中間品和終產(chǎn)品中HCP與HCP抗體的反應情況的分析成為可能。盡管如此，AAE和銀染分析也不能具體得知樣品中具體有哪些種類(lèi)的HCP，尤其是那些與人體有較高免疫原性和對藥物有較大影響的HCP。基于以上問(wèn)題的考慮，Cygnus利用更精準的質(zhì)譜檢測方法與AAE相結合，推出了新一代的AAE和Mass Spectrum覆蓋率驗證服務(wù)。

AAE與Mass Spectrum可對上游和下游工藝中的樣品進(jìn)行分析，覆蓋率的結果更高、更真實(shí)。更主要的是質(zhì)譜可以對樣品中是否存在潛在高風(fēng)險的HCP做出鑒定并提供這些蛋白相關(guān)含量，分子量，等電點(diǎn)等信息。無(wú)論是藥物研發(fā)人員，還是監管人員都可以對某個(gè)工藝中HCP殘留情況有清楚的了解，從而做出更好的判斷。

北京西美杰科技有限公司是美國Cygnus Technologies公司中國區總代理，負責銷(xiāo)售Cygnus全線(xiàn)產(chǎn)品以及覆蓋率驗證，專(zhuān)屬試劑盒定制等服務(wù)，并提供產(chǎn)品和服務(wù)售前和售后技術(shù)支持、服務(wù)樣品寄送、進(jìn)度跟蹤、服務(wù)報告整理等一站式服務(wù)。如感興趣請撥打西美杰熱線(xiàn)電話(huà)：400-050-4006。